小鼠visfatin抗体的制备及应用

visfatin是一种由腹部脂肪组织分泌的相对分子质量(Mr)为52000的脂肪因子[1],序列比对的结果表明该因子与前B细胞集落促进因子(pre-Bcellcol-ony-enhancingfactor,PBEF)的序列一致。目前对vis-fatin的研究表明visfatin具有多功能性。除在炎症反应中促进前B细胞生长的功能外;还在糖脂代谢过程中发挥与胰岛素相似的作用。visfatin可能作为联系糖代谢和脂代谢的重要一环。另外的一些研究表明visfatin能够作为烟碱转磷酸核糖基酶在细胞内促进由NMN向NAD合成,进而在细胞增殖分化方面发挥作用[2]。

此外,visfatin的表达还受到多种参与炎症反应的细胞因子调节,如脂多糖、IL-1,TNF和IL-6[3,4]。肥胖代表低度的全身系统性的炎症,visfatin的多功能性为阐明糖脂代谢障碍与炎症反应之间联系提供了新的线索。目前对visfatin的研究还处于初级阶段,对于它的分子效应机制还知之甚少。我们制备了高效价的特异性小鼠抗visfatin血清,并对正常小鼠组织进行了检测和初步应用。

1材料和方法1.1材料pET28a(NOVAGEN),E.coliBL21为本实验室保存,3T3-L1细胞由张雅欧实验室惠赠。KOD-PLUS-高保真酶、ReverTraAceKit均购自ToYoBo公司;T4连接酶、蛋白markerSM0431、0671购自Fermentas公司;TRIzolRegent购自Invitro-gen;Ni-NTAresin,弗氏佐剂(完全、不完全)均为Sigma公司产品。各限制内切酶、DNAmarkerDL250、DL15000,rTaq酶,dNTP均购自TaKaRa公司。His-tag一抗购自广州威佳。引物由英伟创津(Invitrogen)公司合成。新西兰大白兔,雄性,体质量2000g左右,购自广州医药大学实验动物中心。1.2方法1.2.1小鼠腹部脂肪总RNA提取取4周昆明小鼠新鲜腹部脂肪组织,液氮中仔细研磨后按照TRIzolReagent说明书提取总RNA,经琼脂糖胶电泳以及测A260/A280来检测纯度和浓度,直接用于后续实验或冻存于-80冰箱。1.2.2内脂素visfatin基因的克隆根据GenBank上公布的鼠内脂素mRNA序列(BC018358)设计特异性PCR引物。